表面等离子共振 (Surface Plasmon Resonance, SPR) 技术检测原理:Biacore系统基于表面等离子共振技术 (SPR),实时记录分子结合和解离过程中传感芯片表面分子质量发生的变化,共振角 (即SPR角)就会随之发生变化,从而实时地监测分子间的相互作用。
为了研究两个分子之间的相互作用,其中一个分子被固定到芯片表面上 (Ligand),而另一个分子 (Analyte)以溶液的形式连续流过芯片表面,检测器能实时检测溶液中的分子与芯片表面的分子结合、解离过程,并以SPR响应值的形式显示。
SPR的方法不仅可以检测是否有特异性的结合,还可以通过数据分析软件获得分子间的结合速率常数 (association rate constant,ka)、解离速率常数 (dissociation rate constant,kd)、平衡解离常数 (dissociation equilibrium constant,KD)等参数。
最新版的美国药典 (USP39)、日本药典 (JP17)、2020年版《中华人民共和国药典》都将SPR技术作为分子互作分析“金标准”技术。
佰莱博生物利用 Biacore T200、Biacore S200、Biacore 1K、Biacore 8K 平台,可开展SPR 技术相关研究。
表面等离子共振技术 (SPR) 技术原理SPR 基本实验流程:表面等离子共振技术 (SPR) 实验流程SPR 技术检测样本种类多:表面等离子共振技术 (SPR) 实验流程分析物进样方式:多循环 (Multi-cycle) 模式单循环 (single-cycle) 模式数据分析方式:应用案例:1.小分子与蛋白结合实验2.蛋白与蛋白结合实验3.多肽与蛋白结合实验多肽3不同异构体及突变体与钙网蛋白 LFA 亲和力测定4.核酸与蛋白结合实验Biacore检测OGT适配体与靶点亲和力5.抗体筛选实验SPR 技术应用与抗体筛选实验6.竞争性结合分析实验在化合物 18 和 21 的存在下,泛素与 USP21 的竞争性结合7.分子垂钓实验白芍 ( RPA ) 中 TNF -R1 结合成分的鉴定SPR 技术亲和力大小分析亲和素-生物素结合: 10^−14 M强的抗原-抗体结合: 10^−8~10^−10 MDNA与蛋白的结合: 10^−8~10^−10 M较弱的抗原-抗体结合: 10^−6~10^-7 M酶与底物结合: 10^−4~10^−10 M蛋白与小分子结合: 10^−3~10^−6 M