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非常有启发意义的审稿专家意见:了解MTT和CCK-8检测法的共性和差异(mtt法检测原理)

发布:2024-09-03 浏览:26

核心提示:外审专家提出文章描述中需要修改的问题:(1)如何提取“膜两侧成纤维细胞内的总RNA”?(2)由于Transwell膜的面积及小室体积的因素,穿透膜的细胞数量较低,为什么不单独将细胞接种于多孔板进行生长激素组和空载组的处理后再提取RNA进行基因表达的检测呢?写作中可学习、修改和供他人借鉴的内容:(1)使用Transwell共培养体系相比于使用生长激素组培养上清可以更好的模拟体内环境。如果担心难以提取Transwell膜两侧的细胞,可在新的6孔板每孔内加入1.5 mL trizol裂解细胞,这个体积的triz

外审专家提出文章描述中需要修改的问题:(1)如何提取“膜两侧成纤维细胞内的总RNA”?(2)由于Transwell膜的面积及小室体积的因素,穿透膜的细胞数量较低,为什么不单独将细胞接种于多孔板进行生长激素组和空载组的处理后再提取RNA进行基因表达的检测呢?写作中可学习、修改和供他人借鉴的内容:(1)使用Transwell共培养体系相比于使用生长激素组培养上清可以更好的模拟体内环境。
如果担心难以提取Transwell膜两侧的细胞,可在新的6孔板每孔内加入1.5 mL trizol裂解细胞,这个体积的trizol可同时浸润Transwell膜两侧。
随后用Trizol吹打膜两侧将细胞充分裂解,发现Transwell膜比较结实,可以进行吹打。
再用Trizol裂解另一孔细胞,可使总RNA浓度适宜。
由于购买的6孔板用Transwell小室底面积较大,每组4个Transwell小室即可满足实验所需。
(2)考虑过将成纤维细胞接种于6孔板内,将脂肪干细胞接种于Transwell小室内,这样容易进行RNA和蛋白提取,但担心小室内的脂肪干细胞落入6孔板底部,使成纤维细胞内混入脂肪干细胞,影响实验结果的可靠性。
外审专家提出文章描述中需要修改的问题:(1)描述出采用二维足底图像进行足型判断的具体指标精度。
(2)在足弓特征提取中,未对“足弓中断”指标进行解释,其对足型判断有何作用?写作中可学习、修改和供他人借鉴的内容:(1)有关二维足底图像进行足型判断的具体指标精度的描述:利用GBDT算法综合5种特征对足底压力图像进行足型识别,识别准确率最高可达96.43%,比目前单一的足型判断方法提升了16%,可辅助康复科对测试者足型的诊断。
(2)足弓中断,是通过对足底压力图像足弓部位的像素点进行扫描判断足弓是否中断的特征。
代表足弓中断,输出特征为‘1’,即判断为高弓足的特征;代表足弓部连续的输出特征为‘0’,判断为扁平足或正常足的特征之一。
外审专家提出文章描述中需要修改的问题:软骨细胞增殖和活力检测为什么做的是CCK-8,而非MTT。
写作中可学习、修改和供他人借鉴的内容:许多文献中描述了MTT和CCK-8之间的共性和区别。
MTT和CCK-8都可检测细胞的增殖和活力,两者在检测细胞增殖和活力时的结果没有区别。
但相对来说,CCK-8对细胞的毒性更小一些,稳定性也比MTT好些,并且CCK-8是溶液,不用额外配制,使用便捷,即开即用。
所以实验选择用CCK-8法检测细胞的增殖及活力。
外审专家提出文章描述中需要修改的问题:阿尔茨海默病(AD)认知障碍与年龄相关,6月龄小鼠相对于人类的青壮年,选取此月龄进行探讨的价值与意义是什么?写作中可学习、修改和供他人借鉴的内容:选取6月龄小鼠是因为有研究发现AD早期就可出现线粒体功能障碍,进而加重AD的病理进程,如Aβ的积累及突触损伤等。
还有研究通过对比不同月龄AD模型小鼠海马神经元的变化,6月龄小鼠就已经出现了线粒体的损伤,ATP产生不足,使得机体能量供应不足,导致Aβ清除障碍,进而加重疾病进程。
选用6月龄小鼠作为探讨对象,揭示了早期AMPK敲除对于认知的影响,为临床治疗提供实验基础。

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